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單細(xì)胞懸液制備方法對其細(xì)胞組織的流式制備
技術(shù)文章 2021-02-23

  流式細(xì)胞術(shù)對細(xì)胞組織的各種參數(shù)分析是依據(jù)于單細(xì)胞,依據(jù)不一樣實(shí)體組織成分的特性能夠挑選出不一樣的分散細(xì)胞方法,以達(dá)到對單細(xì)胞產(chǎn)量高、細(xì)胞損害小的目的。


  單細(xì)胞制備的機(jī)械或人工操作的可能會在一定程度上改變原有組織細(xì)胞的某些特性,所以,在處理不同細(xì)胞組織時(shí),應(yīng)盡量探索方法。單細(xì)胞懸液制備方法的應(yīng)用可對細(xì)胞損傷小、產(chǎn)率高,且其還能較大程度的保留其細(xì)胞的原有特性。

  流式細(xì)胞術(shù)

 實(shí)體組織單細(xì)胞懸液制備的機(jī)械法操作:


  應(yīng)用刀片切割粉碎細(xì)胞組織,用均漿機(jī)將其均勻打漿,用線注射針反復(fù)抽取細(xì)胞等,然后應(yīng)用300目尼龍網(wǎng)過濾細(xì)胞將獲得制備后的單細(xì)胞懸液。


一、網(wǎng)搓法


  1、把100目和300目的尼龍網(wǎng)系在一個(gè)小燒杯上


  2、把剪切好的組織碎塊放在尼龍網(wǎng)上,用小鑷子輕輕的摩擦組織塊,并邊摩擦邊用生理鹽水對其進(jìn)行沖洗,直至組織被摩擦完


  3、吸取收集細(xì)胞懸液,以500~800轉(zhuǎn)/分鐘的速度對其細(xì)胞組織進(jìn)行離心沉淀幾分鐘


  4、離心結(jié)束后,將其細(xì)胞固定或低溫進(jìn)行儲存


二、剪切法


  1、把組織塊放在平皿里,在加少量的生理鹽水。


  2、將其組織剪切成均勻的漿狀,在其內(nèi)添加10ml的鹽水。


  3、用吸管吸取組織均勻的漿液,要先用100目的尼龍網(wǎng)將其過濾到試管中。


  4、以1000轉(zhuǎn)/分鐘離心沉淀幾分鐘,然后用生理鹽水洗滌3次,每次以500~800轉(zhuǎn)/分鐘的低速短時(shí)間離心沉淀,去除細(xì)胞碎片。


  5、選用300目的尼龍網(wǎng)對細(xì)胞進(jìn)行過濾去除。


  6、選擇合適的固定液或百分之70的冰乙醇等都可,將其細(xì)胞固定或低溫儲存以備后用。


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